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        过氧化氢(Hydrogen peroxide, H2O2)特异性荧光探针专题
        时间:2019-01-19     作者:懋康原创     文章来源:懋康生物    

        Detection and measurement of hydrogen peroxide:

        过氧化氢(Hydrogen peroxide, H2O2)特异性荧光探针专题

         

        专题关键词:

        ROSGreenTM H2O2 Probe;BES-H2O2-Ac;hydrogen peroxide (H2O2) 过氧化氢;HYDROP-EX;Amplex Red reagent;Peroxidase 过氧化物酶;

         

        专题背景:

        活性氧(ROS)比如超氧阴离子(O2-.),过氧化氢(H2O2)和羟基自由基(HO .)是各种疾病病理发展中的重要调节剂。DCFH和DCFH-DA普遍用作荧光探针测定细胞来源的过氧化氢(H2O2),但这些化合物最大的缺陷在于对H2O2的选择性极其弱。

        为此,很多公司开发特异性的过氧化氢(H2O2)探针,以阐明H2O2导致疾病相关的细胞反应和动力学功能。

         

        一、高选择性过氧化氢探针(BES-H2O2-Ac,BES-H2O2,from wako chemical)

        Wako chemical公司开发两款BES-H2O2,分别检测细胞来源的H2O2和细胞非渗透性的H2O2,具高选择性。

        1)两款探针作用机理如下:


        2)两款探针的应用示例:

        图:BES-H2O2检测Jurkat T细胞的荧光成像和同一视野下的相位对比成像图。Jurkat T细胞用含50μM BES-H2O2-Ac的培养基孵育1h。之后,其中一组细胞用含5mM 丁酸(H2O2产生的刺激物)的培养基处理,而另一组用正常培养基(不含H2O2产生的刺激物)处理,分别培养1h。(图片来源: Professor Hatsuo Maeda, PhD., School of Pharmacy, Hyogo Univ. of Health Sciences)。


        3)两款探针的订购信息:欢迎来电咨询021-54736159,或QQ:2971634497,1563822900。

        货号

        名称

        规格             

        价格(元)  

        028-17811     

        BES H2O2-Ac (cell-permeant),Ex/Em=485/515nm      

        1mg

        咨询

        024-18751

        BES-H2O2 (Cell-impermeant),Ex/Em=485/515nm

        1mg

        咨询

        产品优势:

        □     高度选择性结合H2O2;

        □     BES H2O2-Ac具细胞膜渗透性;

        □     检测细胞来源的H2O2;

        □     适用于荧光成像;

         

        二、高选择性过氧化氢探针(ROSGreenTMH2O2 Probe过氧化氢荧光探针,from MKBio)

        懋康生物(MKBio)开发一款细胞膜渗透性的过氧化氢特异性探针:ROSGreenTMH2O2 Probe。

        1)  探针描述

        过氧化氢(Hydrogen peroxide, H2O2)是一种反映氧代谢副产物,用于许多氧化应激相关态的关键调节剂,参与人体大量的生理和病理活动,比如哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、神经性衰退疾病和唐氏综合征等,但目前对H2O2生成、积累、运输和功能的分子机制仍了解很少,最大的限制在于缺乏灵敏且特异性H2O2探针,用于活细胞研究。目前能得到的H2O2反应性探针的缺陷包括1)来自其他ROS比如过氧亚硝基阴离子(ONOO-)、过氧化基(ROO?)、超氧化物(?O2–)的背景荧光干扰;2)对外源活化酶的需求;水缺乏水溶性或不兼容于水溶体系;4)以及紫外区域的激发光谱特征等。


        ROSGreenTMH2O2Probe正是克服以上缺陷开发的一款过氧化氢(H2O2)选择性探针。探针本身无荧光,可见光区域内无吸收峰。一旦接触H2O2,瞬间激发荧光增加并伴随可见波长吸收带的生成(Ex/Em= 490/514nm)。因其二元的吸收/发射荧光反应,此探针具有较大的动力学范围。与相似的ROS比如O2–,NO,或OCl-相比,ROSGreenTMH2O2Probe对H2O2呈现出>100倍(100-fold)的选择性。


        2)  应用示例

         

        图. Costar 黑色96孔培养板内CHO-K1活细胞用ROSGreenTMH2O2Probe的染色图。图A:对照细胞;图B:用H2O2(100μM)处理5min后的细胞;


        3)订购信息:欢迎来电咨询021-54736159,或QQ:2971634497,1563822900。

        货号

        名称

        规格            

        价格(元)  

        MX5202-1MG     

        ROSGreenTM H2O2 Probe 过氧化氢荧光探针     

        1mg

        1580

        产品优势:

        □     高度选择性结合H2O2;

        □     ROSGreenTMH2O2 Probe具细胞膜渗透性;

        □     检测溶液或细胞来源的H2O2;

        □     适用于荧光成像和流式细胞分析;

         

        三、选择性过氧化氢探针(ADHP,Amplex®Red过氧化氢探针,from MKBio)

        懋康生物(MKBio)供应的10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP),中文名10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪,以商标名Amplex®Red在市场上销售,是目前为止最灵敏和稳定的荧光探针用来检测HRP和H2O2。

        1)  基本描述

        10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP),中文名10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪,以商标名Amplex®Red在市场上销售。ADHP是一种高度灵敏和稳定的过氧化物酶底物,选择性检测过氧化氢(H2O2)。存在辣根过氧化物酶(HRP)的体系中,这一基本无色和非荧光的ADHP与H2O2以1:1的化学定量比反应,生成强红色荧光的试卤灵(Resorufin),可通过荧光光度计和酶标仪分析结果。许多酶反应能产生H2O2,因此,ADHP能够用在偶联酶促反应中检测许多不同酶的生物活性。


        2)  工作原理

        图. 使用ADHP进行偶联酶促反应的工作原理。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成过氧化氢(H2O2),通过辣根过氧化物酶(HRP)催化ADHP反应生成强荧光试卤灵(Resorufin)。


        3)  常见应用

        10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)是目前为止最灵敏和稳定的荧光探针用来检测HRP和H2O2。

        A)  ADHP普遍用来检测许多免疫实验中的HRP;

        B)  ADHP用来检测微量的H2O2;

        Zhou, M.等研究表明ADHP(Amplex®Red)检测过氧化物酶活性,最少能检测1×10?5U/mL HRP;或H2O2,最少能检测50nM H2O2。【文献来源:Zhou M et al. A stable nonfluorescent derivative of resorufin for the fluorometric determination of trace hydrogen peroxide: applications in detecting the activity of phagocyte NADPH oxidase and other oxidases. Anal Biochem. 1997 Nov 15;253(2):162-8.】


        4)  订购信息:欢迎来电咨询021-54736159,或QQ:2971634497,1563822900。

        货号

        产品名称

        规格           

        价格(元)  

        MX5203-1MG      

        10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP) 过氧化氢探针   

        1mg

        339

        MX5203-5MG

        10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP) 过氧化氢探针

        5mg

        1429

        MX5203-25MG

        10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP) 过氧化氢探针

        25mg

        4489

         

        四、过氧化氢清除剂(Hydrogen Peroxide Scavenger from MKBio)

        货号

        产品名称

        规格          

        价格(元) 

        MP0921-1G

        Catalase from bovine liver, 2000-5000 units/mg protein      

        1g

        240

        MP0921-5G

        Catalase from bovine liver, 2000-5000 units/mg protein 

        5g

        800

        MX4809-5MG

        EUK-134 SOD/过氧化氢酶模拟物

        5mg

        528

        MX4809-50MG      

        EUK-134 SOD/过氧化氢酶模拟物

        50mg

        1798

        MX4814-25G

        N,N'-Dimethylthiourea (DMTU) N,N'-二甲基硫脲

        25g

        368

        MX4814-100G

        N,N'-Dimethylthiourea (DMTU) N,N'-二甲基硫脲

        100g

        948

         

        五、过氧化氢活性检测试剂盒(Hydrogen Peroxide assay kit)

        懋康生物作为AAT bioquest在中国的授权代理商,提供该品牌的优质过氧化氢活性检测试剂盒,比色法(Cat#: 11500)和荧光法(Cat#:11501),请根据实验具体需求以及现有检测仪器来选择合适产品。

        货号

        产品名称

        规格

        价格(元)    

        11500    

        Amplite?比色法氢过氧化物检测试剂盒Colorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit

        500 Tests      

        2940

        11501

        Amplite?荧光法氢过氧化物检测试剂盒*红色荧光* Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit   

        500 Tests

        2940


        1)试剂盒特征(比色法,Colorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit)

        测定对象:溶液和细胞裂解液

        检测原理:使用Amplite? IR过氧化物酶底物来定量检测溶液和细胞提取物内的过氧化氢水平。一旦过氧化氢氧化,无色的Amplite? IR产生强蓝色产物,在pH 4-10范围内不受pH影响。

        测定仪器:吸光度测定酶标仪(650nm)

        结果展示:


        2) 试剂盒特征(荧光法,Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit)

        测定对象:溶液和细胞裂解液

        检测原理:使用Amplite? red过氧化物酶底物来定量检测溶液和细胞提取物内的过氧化氢水平。

        测定仪器:荧光酶标仪(540nm/590nm)

        结果示例:

         


         — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】


        上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。


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