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        Deoxyribonuclease I (DNase I) 脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺 (冻干粉形式,即用型液体形式,懋康生物)
        时间:2018-04-28     作者:懋康原创     文章来源:懋康生物    

        Deoxyribonuclease I (DNase I) 脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

        (冻干粉形式,即用型液体形式,懋康生物)

         

        关键词:

        脱氧核糖核酸酶I DNase I;核糖核酸酶 RNase;全能核酸酶 Benzonase;Sigma D5025; Sigma DN25;CAS:9003-98-9;

         

        需求背景:

        分子生物学实验中,在RNA样品的制备过程中,常常会受到样品中不可避免存在的DNA的干扰,为了保证RNA样品的纯度以及满足后续RNA相关研究的顺利开展,需要DNase I有针对性的酶解DNA。另外,在蛋白制品的生产中比如抗体,重组蛋白,细胞裂解这步释放的内含物中除掉蛋白外,往往有很高含量的核酸(DNA, RNA),核酸的存在严重干扰制品的纯化和活性,为此,利用DNase I和RNase组合方式来去除核酸干扰,也很必要。还有,在其他的实验比如TUNEL细胞凋亡检测中常用DNase I对细胞样本核酸进行剪切,以得到实验所需的阳性对照。

         

        基本介绍:

        脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶,偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键,产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸(见下图反应流程图),平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下,DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点;而在Mn2+存在条件下,DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA,如单链DNA、双链DNA,甚至染色质(其切割速率受组蛋白影响)。

        脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,最早从胰腺中分离而来,至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8,DNase的活性依赖于Ca2+,并可被二价金属离子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解,而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。

         

        主要应用:

        ◇   制备不含DNA的RNA样本;

        ◇   RT-PCR反应前RNA样本内基因组DNA等可能存在DNA污染的去除;

        ◇   T7,T3,SP6等RNA聚合酶催化的体外RNA转录后DNA模板的去除;

        ◇   DNase I足迹法(DNase I footprinting)研究DNA-蛋白质相互作用;

        ◇   缺口平移法标记探针用;

        ◇   制备随机DNA片段文库;

        ◇   TUNEL细胞凋亡检测中用于剪切DNA制备阳性对照;

         

        我司(懋康生物MKBio)提供的脱氧核糖核酸酶I(DNase I),来源于牛胰腺,通过亲和色谱纯化所得,不含RNase和蛋白酶污染。为了满足工业用户和科研用户的不同应用需求,我们提供冻干粉(不同比活)和即用型液体形式的DNase I。具体信息如下:


        一、脱氧核糖核酸酶I(DNase I)(冻干粉形式,比活力≥2000 Kunit U/mg protein)

        1.1 产品特征:

        1)   CAS NO:9003-98-9

        2)   蛋白纯度:≥80%(biuret),色谱纯化

        3)   比活力:≥2000Kunit Units/mg protein

        4)   活力定义:25℃,pH5.0条件下DNase催化底物DNA,使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位(Kunitz unit)。

        5)   激活剂:多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

        6)   抑制剂:β-巯基乙醇;螯合剂;SDS;肌动蛋白;并没有特异性抑制DNase I酶活的通用抑制剂,比如柠檬酸盐抑制Mg2+活化的DNase I,但不能影响Mn2+激活的DNase I。

        7)   溶解性:溶于0.15M NaCl(5mg/ml),无色透明溶液


        1.2 订购信息:产品性能媲美Sigma D5025,本品生产至少十年以上,销售到国内各大实验室,欢迎各大工业和科研用户前来咨询。电话:021-54736159,QQ:2971634497。

        产品名称

        产品编号

        规格         

        价格          

        Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein

        脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

        MF0401-15KU   

        15KU

        380

        MF0401-50KU

        50KU

        980


        二、脱氧核糖核酸酶I(DNase I)(冻干粉形式,比活力≥500 Kunit U/mg protein)

        2.1 产品特征:

        8)   CAS NO:9003-98-9

        9)   分子量:~31 kDa

        10)同义名:DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脱氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶,脱氧核糖核酸酶A

        11)  比活力:≥500 Kunit Units/mg protein

        12)  活力定义:在50μl含40mM Tris-HCl, pH8.0,2.5 mM MgSO4,1mM CaCl2的反应缓冲体系中,37℃,10min内完全降解1μg λ-DNA所需的酶量即为一个活力单位。此反应条件下得到的一个单位DNase活力约等于一个Kuntiz unit。

        13)  激活剂:多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

        14)  抑制剂:EGTA,EDTA,盐离子浓度(>100mM)都能降低DNase活性

        15)  热失活:含终止溶液(20mM EGTA,pH 8.0)内65℃,处理10min

        16)  溶解性:溶于缓冲液(≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油)


        2.2 订购信息:产品性能媲美Sigma DN25。比活低于MF0401(≥2,000 Kunit U/mg protein),价格更加经济。欢迎咨询,电话:021-54736159,QQ:2971634497。

        产品名称

        产品编号

        规格 

        价格        

        Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein  

        脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

        MF0402-10MG   

        10MG     

        250

        MF0402-50MG

        50MG

        680


        三、脱氧核糖核酸酶I(DNase I)(即用型溶液)

        3.1 产品特征:

        试剂盒形式提供,其中DNase I以即用型溶液(1U/μl) 形式提供,酶经过严格质控能极好的消化模板;还提供10× Reaction Buffer和10× Stop Solution,节省了试剂配制的时间,用起来更加快捷。


        3.2 试剂盒包装:

        组分编号

        组分名称

        货号(规格)

        MF0405-200U      

        MF0405-1000U    

        MF0405-A    

        DNase I Solution (RNase & Protease-free)     

        200U

        1000U

        MF0405-B

        10× Reaction Buffer

        200μl

        1ml

        MF0405-C

        10× Stop Solution

        200μl

        1ml


        3.3 使用方法【以RT-PCR反应前RNA样本内DNA污染的去除为例】

        1)DNA模板经核酸内切酶线性化,用酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA,用乙醇沉淀后,溶于适量无菌去离子水中。

        2)往一个RNase-free EP管内依次加入下列试剂:

        RNA样本

        1μg             

        10× Reaction Buffer

        1μl

        用DEPC-treated Water补充    

        至9μl

        DNase I (1U/μl)

        1μl

        【注意】:如果需要处理较大量的RNA样品,可按比例放大上述反应体系。条件许可下最好往体系内加入适量RNase抑制剂(货号:MF0218-2KU)以防止RNA降解。

        3)   37℃孵育30min。

        4) 往上述体系内加入1μl 10× Stop Solution使其终浓度为1×,混匀。之后65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】:一定要先加入10× Stop Solution,然后再加热失活RNase I,否则先加热可能引起RNA被降解。

        5)加热处理后的RNA样品即可直接用作RT-PCR反应用的模板。


        3.4  订购信息:即用型试剂盒,科研单位且用量不多用户的首选。欢迎咨询,电话:021-54736159,QQ:2971634497。

        产品名称

        产品编号

        规格            

        价格             

        DNase I Solution (RNase & Protease-free)          

        脱氧核糖核酸酶I溶液(无RNase &蛋白酶)

        MF0405-200U          

        200U

        198

        MF0405-1000U

        1000U

        848

         

        关产品

        货号

        名称

        规格          

        MF0402-10MG      

        Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein      

        10MG

        MF0401-15KU

        Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein

        15KU

        MF0405-200U

        DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脱氧核糖核酸酶I溶液

        200U

        MF0203-100MG

        Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas

        100mg

        MP1509-25KU

        Benzonase Nuclease 全能核酸酶

        25KU

        MF0201-100MG

        Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K

        100mg

        MF0218-2KU

        RNase Inhibitor (40U/μl), Murine小鼠RNA酶抑制剂

        2KU

        MF0404-500ML

        DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(无DNase、RNase ) 

        500ml

         

         — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

         

        上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。 

        K
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