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        Zymo Research Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™ 酵母转化试剂盒
        时间:2017-08-25     作者:懋康原创     文章来源:懋康生物    

        【温馨提示】:

        见我司懋康生物整理的酵母双杂交检测(Yeast two-hybrid assay)产品专题

         

        基本描述

        Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?(酵母转化试剂盒)是一款专门设计用于酵母转化和文库筛选的试剂盒,比目前商业或公开的文献方法更快捷和更有效。本试剂盒制备的酵母细胞可立即用于转化或冻存待用(≤ -70°C)。本试剂盒制备的细胞适用于环形和线性DNAs转化,同时也能用于其他真菌包括C. albicans,S. pombe和P. pastoris的转化。

         

        产品亮点:

        ~ 高转化效率:每μg质粒DNA(环形)可产生105- 106个酵母转化子;

        ~ 制备好的感受态细胞可冻存后待用;

        ~ 快速简单步骤于10min内可制备酵母感受态细胞;

        ~ 简单单一步骤,1h内完成转化;

        ~ 适用菌株类型广(S. cerevisiae, C. albicans, S. pombe, Pichia pastoris);

        ~ 简单方法用于多质粒转化;

         

        产品组分:试剂盒可做120个常规转化或600个微量转化实验。试剂盒4℃一年有效。

        组分                          

        规格                   

        保存                   

        EZ1 Solution

        60ml

        0-4℃

        EZ2 Solution

        6ml

        0-4℃

        EZ3 Solution

        60ml

        0-4℃

         

        操作流程【见下图】:

        A. 感受态细胞制备

        30℃,于10ml YPD肉汤培养酵母菌直至中数量级(~5 x 106-2 x107cells/ml或OD600= 0.8-1.0)。以下步骤室温进行。

        A1,500 x g离心细胞4min,吸掉上清液;

        A2,加入10ml EZ1溶液清洗沉淀。重新离心沉淀细胞,吸掉上清液;

        A3,加入1ml EZ2溶液重悬沉淀细胞。

        此时获得的感受态细胞即可直接用于转化或冻存备用(≤ -70°C)。注意需缓慢冻存细胞,不可使用液氮瞬间冻存细胞。


        B. 转化

        以下步骤适用于新鲜制备和冻存(室温融化)的酵母感受态细胞。

        B1,取50μl感受态细胞与0.2-1μg DNA(体积少于5μl)混合;加入500μl EZ3溶液,完全混合;

        B2,30°C孵育45min,孵育过程中用手指轻弹或低速涡旋(如果适用于转化DNA)2-3次让其混匀;

        B3,从上面转化混合液中取50-150μl到适当平板上,没有必要沉淀或清洗细胞。、

        B4,30°C孵育平板2-4天使得转化子生长。

         

        订购信息:Zymo Research原装正品,现货供应。欢迎来电咨询,021-54736159,QQ:2971634497。

        货号       

        产品名称

        规格                

        价格(元)     

        T2001

        Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?(酵母转化试剂盒)   

        120 Rxns

        1532

        T2001 Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit? User Manual


        常见问题(FAQs):

        1. 试剂盒内含什么及工作原理?

        答复:试剂盒所用步骤是特别设计,某些步骤,类似于基于锂阳离子的方法,不需要原生质体制备。作用机制可能涉及一些代谢通路,但并未完全清晰。

        2. 试剂盒是否适用于C. albicans,S. pombe,或Pichia pastoris?

        答复:根据Zymo实验室内部数据,适合以上菌株感受态细胞制备和转化。

        3. 感受态细胞≤ -70°C能存放多久?感受态细胞的融化方法?

        答复:感受态细胞≤ -70°C保存半年转化效率不会有损失,超过半年效率开始逐渐降低。

        4. 感受态细胞的反复冻融会影响转化效率?

        答复:室温融化。

        5. 限制性内切酶处理的质粒是否不经纯化就能直接转化?

        答复:是的。不同的内切酶消化缓冲液对转化效率影响微弱。每个转化实验将DNA体积调整到5μl。

        6. 是否需要使用含山梨醇的平板?

        答复:不需要。任何平板都适合本转化实验。

        7. 是否添加载体DNA?

        答复:不需要添加载体DNA。


        引用文献(Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?):

        Plasmids were transformed with high efficiency using the Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit? in the construction of synthetic yeast promoters. Researchers showed that decreasing nucleosome affinity correlated with increasing promoter strength and expression levels higher than native species.

        Curran KA, et. al. (2014) Design of synthetic yeast promoters via tuning of nucleosome architecture. Nat Commun. 5:4002.

        The Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit was used to integrate various TEF1 promoter mutants upstream of a gene in Saccharomyces cerevisiae. Efficient transformation allowed comparison of gene activity and, therefore, determination of promoter strength.

        Nevoigt, E., et al. (2006) Engineering of promoter replacement cassettes for fine-tuning of gene expression in Saccharomyces cerevisiae. Appl Environ Microb, 72(8): 5266-5273.

         

         

         — — Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

         

         

        上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。



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